作为荧光原位杂交技术的简称，FISH检测凭借特异性强、灵敏度高、检测周期短的优势，已经成为很多疾病诊断、预后评估、用药指导的核心参考依据，适用场景覆盖妇产科、血液科、肿瘤科、病理科等多个科室，北京协和医院、上海交通大学医学院附属瑞金医院等国内三甲医院都已常规开展该检测项目。为了帮大家解决实际就诊中碰到的相关疑问，本文还整理了临床高频咨询的问题汇总，大家可以按需查阅对应内容。

FISH检测到底是什么？

　　FISH检测的基础定义:FISH的全称是荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization），是一项基于核酸碱基互补配对原理开发的分子诊断技术，属于原位杂交技术的分支，区别于传统的同位素标记技术，它采用荧光基团标记探针，不会产生放射性污染，检测安全性更高。目前这项技术已经是国内外分子病理科的常规检测项目，临床应用已经超过40年，技术成熟度非常高。

　　FISH检测和其他基因检测的核心差异:和普通的PCR、二代测序需要提取核酸再检测不同，FISH检测可以直接在细胞、组织切片的原位进行检测，能够直观看到目标核酸序列在细胞内的定位、拷贝数变化，还能保留细胞的原始形态信息，这是其他多数分子检测技术不具备的优势。对于需要明确基因位置、细胞嵌合比例的检测场景，FISH检测是不可替代的技术手段。

　　FISH检测的技术迭代情况:经过多年的迭代优化，目前FISH检测已经实现了多色探针同时检测，一次实验可以同时定位多个目标核酸序列，检测效率大幅提升。现在临床常用的多色FISH技术，最多可以同时标记7种不同颜色的探针，一次实验就能排查多个常见的基因异常，进一步降低了检测成本、缩短了出结果的周期。

FISH检测的临床意义有哪些？

　　产前诊断领域的应用意义:在产前诊断中，FISH检测主要用于排查胎儿染色体数目异常，常见的21三体综合征（唐氏综合征）、18三体综合征、13三体综合征、性染色体异常等，都可以通过羊水细胞、绒毛细胞的FISH检测快速确诊，常规1-3天就能出结果，比染色体核型分析的2-3周周期短很多，能快速给孕妇和家属提供决策参考。目前国内三甲医院的产前诊断中心，都会把FISH作为唐筛高风险孕妇的快速筛查项目。

　　实体肿瘤领域的应用意义:在实体肿瘤诊疗中，FISH检测的应用范围最广，首先可以用于肿瘤的分型诊断，比如乳腺癌、胃癌患者的HER2基因扩增检测，是判断患者是否适合使用曲妥珠单抗等抗HER2靶向药的核心依据；非小细胞肺癌患者的ALK、ROS1基因融合检测，也可以用FISH检测确诊，直接指导靶向药选择。除此之外，FISH检测还可以用来评估肿瘤的预后风险，判断肿瘤的复发概率。

　　血液系统疾病的应用意义:在白血病、淋巴瘤等血液系统疾病的诊断中，FISH检测可以用来检测特征性的染色体易位、融合基因，比如慢性粒细胞白血病的BCR/ABL融合基因，急性早幼粒细胞白血病的PML/RARA融合基因，都是确诊和评估预后的核心指标，还能用来监测治疗后的微小残留病水平，判断治疗效果，帮助医生调整后续的治疗方案。

做一次FISH检测要花多少钱？

　　不同检测项目的收费差异:FISH检测的收费和检测位点的数量直接相关，常规的产前染色体非整倍体快速检测（就是查21、18、13、性染色体这5个位点），国内公立医院的收费区间在1500-2500元左右，比如广州中山大学附属第一医院的该项检测收费在1800元左右；如果是乳腺癌HER2基因FISH检测，收费在800-1200元左右，属于医保报销范围内的检测项目，符合指征的患者可以走医保结算。

　　不同检测套餐的收费差异:如果是同时检测多个位点的组合项目，比如白血病融合基因FISH筛查套餐，检测10个左右常见融合基因位点的话，收费在4000-6000元区间；如果是更复杂的全染色体核型FISH筛查，收费可能会超过1万元。第三方检验机构的收费通常会比公立医院低10%-20%左右，具体收费可以咨询就诊的医院或者正规检验机构。

FISH检测结果的准确率高吗？

　　FISH检测的常规准确率水平:FISH检测属于临床确诊级的分子诊断技术，针对染色体数目异常、基因扩增、融合基因的检测准确率可以达到98%以上，是很多疾病诊断的金标准之一，比如产前的FISH检测结果如果提示染色体异常，不需要重复检测就可以作为引产或者后续干预的参考依据。像四川大学华西医院、上海瑞金医院这类头部三甲医院的分子诊断中心，FISH检测的准确率已经稳定在99%以上，临床认可度非常高。

　　影响检测准确率的常见因素:如果样本质量不合格，比如羊水样本中有大量母体细胞污染、石蜡切片存放时间超过5年导致核酸降解，可能会出现假阴性或者假阳性的情况，另外检验医师的判读经验也会影响结果的准确率，所以建议大家选择有正规分子诊断资质的医疗机构做FISH检测，采样时也要严格按照医护的要求操作，避免样本污染影响结果。

FISH检测的原理是什么？

　　核心碱基互补配对原理:所有生物的DNA/RNA序列都遵循碱基互补配对原则，即A对应T（U）、C对应G，FISH检测就是利用这个特性，提前人工合成和目标检测序列完全互补的核酸探针，探针上提前标记了可以发出荧光的标记物。不同的检测项目会配置不同的探针，针对性检测对应的目标序列。

　　检测信号的识别逻辑:将处理好的样本和探针共同孵育后，探针会自动和样本中存在的互补目标序列结合，也就是发生“杂交”，之后通过荧光显微镜观察样本中的荧光信号数量、位置，就能判断目标序列是否存在、拷贝数是否异常、有没有发生易位等结构变化。比如HER2基因扩增的样本，在荧光显微镜下会看到大量的HER2探针信号，明显高于正常细胞的信号数量。

FISH检测的流程是什么样的？

　　样本采集和预处理:FISH检测的样本类型非常多样，包括外周血、骨髓、羊水、绒毛、石蜡病理切片、细胞涂片等都可以作为检测样本，采样后需要先对样本进行固定、通透处理，让探针可以顺利进入细胞内和目标序列结合。如果是已经做好的石蜡病理切片，不需要额外采样，直接把切片送到病理科检测即可。

　　杂交和洗涤过程:预处理后的样本会和配置好的荧光探针混合，放在37℃的恒温孵箱中杂交4-16小时不等，让探针和目标序列充分结合，之后会用不同浓度的洗脱液洗掉没有结合的多余探针，避免非特异性信号干扰结果判读。这个过程对温度、湿度的要求很高，需要专业的实验室设备才能完成。

　　结果判读和报告出具:处理好的样本会放在荧光显微镜下，由经验丰富的检验医师计数至少100个细胞的荧光信号情况，统计异常信号的占比，结合临床信息给出最终的检测报告，常规检测出报告的时间在1-7天不等，不同的检测项目周期会有差异，快速产前检测的出结果时间会更快。

FISH检测常见的疑问有哪些？

　　FISH检测和免疫组化有什么区别？:免疫组化检测的是蛋白水平的表达，FISH检测的是基因水平的异常，比如乳腺癌HER2检测，先做免疫组化，如果是2+的弱阳性，就需要进一步做FISH检测确认是否有基因扩增，来明确是否符合靶向药使用指征。两种检测是互补的关系，不能互相替代。

　　FISH检测有没有辐射？对身体有害吗？:FISH检测用的是荧光标记，没有放射性，采样只是常规的采血、取羊水或者用已经有的病理切片，不会对身体造成伤害，孕妇也可以放心做，不会对胎儿产生不良影响。

　　FISH检测阳性就一定是得了癌症吗？:不一定，FISH检测阳性只是提示存在对应的基因异常，比如产前FISH阳性提示染色体异常，代表胎儿存在遗传病风险，肿瘤相关的FISH阳性只是提示存在对应的驱动基因异常，可以指导用药，不是确诊癌症的唯一依据，癌症确诊还要结合病理形态、影像学等检查结果。

　　FISH检测多久能出结果？:不同的检测项目出结果的时间不同，快速的产前FISH检测1-3天就能出结果，实体肿瘤的单基因FISH检测3-5天出结果，复杂的多基因筛查套餐可能需要5-7天出结果，具体可以咨询检测机构。

　　什么情况下需要做FISH检测？:常见的适用情况包括：唐氏筛查高风险需要做产前诊断的孕妇、乳腺癌/胃癌等需要评估HER2状态的实体肿瘤患者、疑似白血病/淋巴瘤的血液系统疾病患者、疑似单基因遗传病的患者、需要评估靶向药用药指征的肿瘤患者等，具体可以听从主治医生的建议。

　　FISH检测阴性是不是就没有问题？:FISH检测阴性只能说明本次检测的目标位点没有异常，如果临床高度怀疑有其他位点的基因异常，需要进一步做基因测序等其他检测排查，不能仅靠FISH阴性就排除所有疾病风险。

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